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金黄色葡萄球菌 试述脓汁标本中金黄色葡萄球菌的检验程序 休 闲居 编 辑 >>>>>>>>休闲养生网回答： 1、采样 采集样品首先采取可疑的食物，其次采取病人的呕吐物，剩余的食品，或采取病人的粪便、血液。以及有关食品加工人员的皮肤感染性化脓创的脓汁等。、 2．国家标准检验方法GB4789．10-84，检验程序如图5-9。 1）增菌和分离培养 将25g检样加于225mL灭菌生理盐水中或吸取液体检样5ml于7．5％氯化钠肉汤50ml进行增菌；同时挑取混悬液接种血平板及Bakd-Rarker氏培养基；取可疑菌落再接种血琼脂平板做纯培养。然后进行革兰氏染色。 2）血浆凝固酶试验 吸取1：4新鲜兔血浆0．5mL于小试管中，再加入培养24小时葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0．5mL振荡混匀，37℃温箱或水浴内每半小时观察一次，观察6小时，如呈现凝块即为阳性，同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉浸液肉汤作为对照。 血浆凝固试验也可采用玻片法。把兔血浆滴加于载玻片的一端，然后用白金耳挑取菌落与血浆充分混匀、在载玻片另一端以生理盐水代替血浆做阴性对照。混合舌立即观察，若出现凝块即为阳性。 病原性葡萄球菌多数产生血浆凝固酶，非病原性的一般不产生。因此，该法是判定葡萄球菌有无致病性的重要指标。 3．肠毒素的测定 动物试验可用检样稀释液直接作动物试验或按以下方法将分离菌株培养制备肠毒素。 ①肠毒素的制备： 肠毒素的制备有固体培养法和液体培养法。 ②肠毒素测定： 注射前应先喂给幼猫少量的食物，以便观察反应。取上清液按幼猫体重每100g 1mL的剂量腹腔注射或加大2—3倍量口服。然后仔细观察，一般攻毒后0．5～2小时内幼猫发生呕吐、腹泻、体温上升、畏寒等症状，经4～5小时后逐渐恢复。同时实验时用未接种菌的培养基做同样处理的阴性对照。 4、血清学反应 可用于检测食物、培养物或滤液等标本中的细菌或肠毒素。血清学反应不仅简便快捷，而且能对毒素做出最后定型： ①菌体荧光抗体染色法 涂片：食品样品接种于葡萄糖肉汤培养基，37~C培养24～48小时。用接种环取上述增菌液，涂布于载玻片上。 干燥：每一个培养物涂布3～4个点， 37度培养箱内干燥。 固定：将干燥好的玻片放在克氏固定液中固定3－5分钟，再将固定的玻片标本放入95％酒精中浸泡1分钟， 加抗血清：然后充分干燥，用接种环取1环荧光抗血清轻轻加于菌膜上． 反应：然后37度培养箱内作用30分钟。 冲洗浸泡：取出作用好的玻片用0.01mol/L PH7.4 PBS液冲洗玻片上荧光血清，最后将标本放于95％酒精液中浸泡1分钟左右取出，用荧光显微镜镜检。 有特异性明亮荧光的为阳性或者菌量在一个视野中有数个或十几个细菌以上者为阳性。 ②毒素的检出 金黄色葡萄球菌毒素蛇检出有免疫琼脂扩散法、反向间接血凝法，放射免疫测定法、免疫荧光法、酶联免疫吸附测定法、A蛋白血凝试验、核酸探针检测，乳胶凝集试验等。 |