近日，第四军医大学唐都医院临床实验科采用克隆技术，研究出一项“人端粒酶逆转录（hTERT）基因核心启动子调控的人单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韦（HAS-tk/GCV）系统宫颈癌细胞（HeLa）特异性治疗”新技术，该技术对体外HeLa具有明显的杀伤作用。

 

    据介绍，宫颈癌是一种死亡率较高的恶性肿瘤，传统治疗方法以手术、化疗及放疗为主，但患者生存率仍不理想。随着分子生物学技术的发展，自杀基因疗法在肿瘤治疗中获得了一定成功。科研人员已经证明，抑制端粒酶的活性能明显抑制肿瘤生长，甚至迫使癌细胞自杀。hTERT基因在90%的人类肿瘤组织中呈过表达，具有明显的肿瘤特异性。

 

    为探讨hTERT基因对HeLa特异性治疗的新方法，研究人员采用克隆技术，构建hTERT基因启动子调控的胸苷激酶基因（tk）真核表达载体pCI-neo/hTERT-tk，分别用脂质体法转染HeLa和正常血管内皮细胞（ECV304），并通过克隆扩增后，用RT-PCR法检测tk基因的表达情况，用流式细胞术检测hTERT调控的HSV-tk/GCV系统对宫颈癌细胞及血管内皮细胞的杀伤作用。

 

    检测结果发现：在重组质粒pCI-neo/hTERT-tk中，出现与tk基因大小相符的约为1100bp的条带；HeLa细胞转染pCI-neo/hTERT-tk质粒后，可测到tk基因阳性表达，而正常的ECV304细胞转染后则无tk细胞表达；HeLa细胞凋亡率为36.7%，ECV304细胞凋亡率为5.2%，两组相比有显著性差异（P《0.01）。同时，HeLa细胞S期所占比例为11.9%，而ECV304细胞S期所占比例高达32.7%（P《0.01）。提示hTERT在恶性肿瘤中阳性表达率高，在正常细胞中低表达或不表达。

 

    研究人员认为，hTERT基因是决定端粒酶活性的重要组成部分，只有在端粒酶表达阳性的肿瘤细胞中，hTERT基因启动子才发挥作用，使tk基因得到表达；同样，只有在肿瘤细胞中得到表达的tk基因产生的tk酶，才可将更昔洛韦（GCV）转化为细胞毒物，抑制DNA的合成和复制，导致细胞凋亡。同时，hTERT-tk基因在正常细胞中，无论是转染前还是转染后均无法引起明显的细胞凋亡这一结果表明，hTERT-tk/GCV系统仅特异于肿瘤细胞，从而实现了肿瘤基因治疗特异性这一根本目的。

 

（转载自《中国医药报》）